1Уламжлалт анагаахын шинжлэх ухаан,технологи,үйлдвэрлэлийн корпораци,2Норвегийн Осло хотын эм судлалын их сургууль,3Мал Эмнэлгийн Эрдэм Шинжилгээний Хүрээлэн, Иммуногистохимийн лаборатори
Өгүүллийн PDF-ийг татах
Artemisa Sphaerocephala Krasch, grown in the territory of Mongolia has confi rmed to possess considerable amount of Polysaccharide. This secret revelation of high molecule content of polysaccharide is regarded as a new discovery in natural sciences. For the past years, scientist has been striving to fi nd antigen from polysaccharide of plants for antibody protection in order to eliminate immune defi ciency in the body. The aim of our work intends to defi ne the mechanism of effects of polysaccharide contained in one Gobi plant. The study was carried out on polysaccharide preparation for immunization of Artemisia Sphaerocephala Krasch. Study on the effect of the preparation on spleen and lymph nodes: The most effective period of Artemisia Sphaerocephala Krasch preparation on the animals was observed by “Olympus” microscope by coloring with Methylgreen-Pyronin by the alternative method of revealing nucleic acid of Papanheum Unna., Cook. The actions against of anticomplementary activity of polysaccharide preparation from Artemisia Sphaerocephala Krasch: The polysaccharide preparation showing 76.59% effective in immunoreactions. Our series of investigation prove that the preparation. Membrane protection effect of polysaccharide preparation of the Artemisia Sphaerocephala Krasch: Polysaccharide preparation of Artemisia Sphaerocephala decreased of the accumulation on lipid per oxidation products and showed membrane protective and antioxidant effect. The preparation showed that increases the stability of cells membrane. Artemisia Sphaerocephala Krasch is immune stimulatory activity and increase body resistance is due to polysaccharides.
Үндэслэл
Манай орны өмнө зүгийн уудам их говийн бүсийг дагаж асар их нөөцтэй ургасан, гол гэсэрийн овгийн шарилж, шавагны төрөл дотроос урьд өмнө нь судлагдаагүй, үрэндээ сахар ихээхэн агуулсны хувьд онцгой сонирхол татахуйц ургамлын нэг бол Бөндгөр шарилж юм .Байгалийн гаралтай эмийн түүхий эдээс цэвэршүүлэн гаргасан бодисыг эмчилгээний парактикт хэрэглэх нь химийн гаралтай бодисыг бодвол давуутай байдаг. Орчин үеийн анагаах ухаанд дархлаа дэмжих бэлдмэл үйлдийг эмчилгээнд өргөн хэрэглэхийн зэрэгтцээ дээрх үйлдэл бүхий бодисыг байгалийн гаралтай нэгдлээс хайх, химийн болон рекомбинант аргаар гаргаж авах, үйлдлийг нь судлах туршилтын ажлууд хийгдсээр байна. Бид өөрийн орны эндемик ургамал Бөндгөр шарилжны полисахарид бодисын хими, фармакологийн судалгааг явуулахад дархлаа дэмжих магадлалтай байх хандлага ажиглагдсан ба цаашид гүнзгийрүүлэн судлах шаардлагатай байна.
Зорилго
Монгол нийтийн нутагшмал ургамал Бөндгөр шарилжны үрийн полисхаридын дархлааны урвалын эрчимд үзүүлэх нөлөө, үйлдлийн механизмаас судлах нь энэхүү судалгааны ажлын зорилго болно.
Зорилт.
1. Бөндгөр шарилжны үрийн полисахаридын бэлдмийн туршилтын амьтны дархлалын урвалд нөлөөлөх байдлыг Papanheum, Unna, Cook-ийн нуклейн хүчил илрүүлэх (Дезоксиатибонуклейн DNС, рибонуклейн-RNС) альтернтив аргаар судлах.
2. Полисахаридын бэлдмэлийн хавсаргын тогтолцооны эсрэг үзүүлэх нөлөөг судлах
3. Бөндгөр шарилжны үрийн полисахаридын бэлдмэлийн эсийн мембраны тэсвэрт чанар , хэт исэлдэлтийн эсрэг үзүүлэх нөлөө, тэдгэрийн үйлдлийн мөн чанарыг судлах
Материал, арга зүй
Судалгаанд 10-р сард түүж, сэрүүн газар хатааж бэлтгсэн Бөндгөр шарилжны үр (Artemisia sphaero-cephala Krasch)–ийг ашиглав. Бэлдмэлийн дархлааны урвалд үзүүлэх нөлөөг судлахын тулд нийт 54 харх, 254 туршилтын хулгана дээр туршил явуулж дүгнэлт өгсөн. Туршилтыг 2000-2003 онд УАШУТҮК-ийн Уламжлалт эм судлалын лаборатори, МЭЭШХээлээлэнгийн Иммуногистохимийн лаборатори, ХХТХүрэнгийн Өндөр молекулт бодисын лабораторид гүйцэтгэв.
Бэлдмэлийн дархлааны урвалын эрчимд үзүүлэх нөлөөг дэлүү, лимфийн булчирхайн фонон дээр судлах
ICR үүлдрийн 60 хулгана авч туршилт , хяналтын 2 бүлэг болгоод Бөндгөр шарилжны үрийн полисахаридын бэлдмэлийг 30 мг/кг тунгаар амаар өгсөн. Хулгана бүрд И.Е.Ковалевын аргаар тест антиген олох хонины цусны улаан эсийг 10%-ийн 0.2 мл-ээда схлдсаар тарьж даулхлааждарлалт явуулсан. Ийнхүү дархаажуулалт явсны раах 3, 6, 24, 48, 72 цагууд, 5.7 дахь хоногуудад амьтнаа нядлаж (slaughtered) элэг, дэлүү, тимус, уушиг, нарийн гэдэсний лимф узел, пейоровын товгор зэиргээс материал авч Карнаугийн уусмалд 2 цаг, 960 спрт I-4 цаг, 960 спирт II-4 цаг, 960 спирт III-4 цааг мөн ксилол I-2 дааг, ксилол II-2 цаг, ксилол III-2 аг тосгүйжүүлэх амжлагаар дамжуулсан. Бэхжүүлэх зорилгоор парафин I-д 30 минут, парафин 2-т 30 минут, парафи 3-т 30 минут тус тус дамжуулаад лимфойд болон цуллаг эдээр тус тусад парафинан блок бэлтгэв. Цутгасан блокоо хөргөгчинд царцаагаад дараа нь 3 микроноор микротомд зүсч зүсмэг тус бүрийг тавиур шил дээр 500 -д 24 цаг хатаав. Хатсаных нь дараа мөн ксилол II-5 минут, ксилол I-5 минут, 1000 ABSO I, 1000 ABSO II, 960 ALC, 900 ALC, 800 ALC, 700 ALC-д тус бүр 3 минут дамжуулж нэрмэл ус, PH=4.8 Acetat buffer-ээр зайлав. Нуклейн хүчил илминулэх өвөадмөмө бPдаг Methyl green-Pyronin-op 25 ут буда өн РН=4.8 Acetat buffer-ээр зайлж чийгголй болтол хатаагаад мөн 930 спиртэнд зайлав. Ксилол I, ксилол II, ксилол III-д тус бүр 5 минут дамжүллаа. Эцэст нь бэлдэц дээрээ бальзам түрхэж бүрхүүл шил нааж хатаах шүүгээнд 72 цаг байлгав. Бөндгөр шарилжны үрийн бэлдмэл нь амьтны дархлааны урвалд хэрхэн нөлөөлж бейй байдлыг Papanheum, Unna, Cook-ийн нуклн хүчил (Дезоксихибонтеклейн-DNC, рибонуклейн-RNC) илрүүлэх альтернатив аргаар Methyl green-Pyronin-ooр будаж 1200 дахин өсгөлттэй “Olympus” маркийн микрскопоор харж тодорхойллоо.
Бөндгөр шарилжны полисахарид бодисын хавсаргын эсрэг тогтолцоонд үзүүлэх нөлөөг судлах
Полисахаридтай хольсон хонины цусны улаан эсийг 9 мг/мл физиологийн мгсмалаар 2 чдаа угаана. Дараа нь бухын альбумин 2 /мл-ийг авч мөн 0.02%-ийн аахид натри агуулсан вероналын буфер (РН–7.4)-ээр дхин угаана. Туулайн цусны улаан эсийг хонины лаасны эдлаан эстэй хольж 370-т 30 минут инкубацад эдгээр холимгоо 9 мг/мл физиологийн уусмалаар 2 дахин зайлж, бухын альбумин 2 мг/мл, мөн 0.02%-ийн ацид натри агуулсан веажоналийн буферээр дахин сугаана. Эндээс эсээ ялган аваад 1%-ийн эсийн успенз бэлтгэж VB/BSA буфер (РН - 7.4)-ээр мөн угаагаад 405 нм-ийн долгионы уртад хэмжинэ.
өгсөн. Хулгана бүрд И.Е.Ковалевын аргаар тест антиген олох хонины цусны улаан эсийг 10%-ийн 0.2 мл-ээда схлдсаар тарьж даулхлааждарлалт явуулсан. Ийнхүү архаажуулалт явусны раах 3, 6, 24, 48, 72 цагууд, 5.7 дахь хоногуудад амьтнаа нядлаж (slaughtered) элэг, дэлүү, тимус, уушиг, нарийн гэдэсний лимф узел, пейоровын товгор зэиргээс материал авч Карнаугийн уусмалд 2 цаг, 960 спрт I-4 цаг, 960 спирт II-4 цаг, 960 спирт III-4 цааг мөн ксилол I-2 дааг, ксилол II-2 цаг, ксилол III-2 аг тосгүйжүүлэх амжлагаар дамжуулсан. Бэхжүүлэх зорилгоора панафин I-д 30 минут, парафин 2-т 30 минут, паафи 3-т 30 минут тус тус дамжь плаад лимфойд болон цуллаг эдээр тус тусад н арафинан блок бэлтгэв. Цутгасан блокоо хөргөгчинд царцаагаад дараа нь 3 микэноноор микротомд зүсч зүсмэг тус бүрийг тавиур шил дээр 500 -д 24 цаг хатаав. Хатсаных нь дараа мөн ксилол II-5 минут, ксилол I-5 минут, 1000 ABSO I, 1000 ABSO II, 960 ALC, 900 ALC, 800 ALC, 700 ALC-д тус бүр 3 минут дамжуулж нэрмэл ус, PH=4.8 Acetat buffer-ээр зайлав.
Нуклейн хоочил илминулэх өвөадмөмө бPдаг Methyl green-Pyronin-op 25 ут буда өн РН=4.8 Acetat buffer-ээр зайлж чийгголй болтол хатаагаад мөн 930 спиртэнд зайлав. Ксил I, ксилол II, ксилол III-д тус бүр 5 минут дамжүлллаа. Эааэст нь бэлдэц дээрээ бальзам түрхэж бүрхү шил наж хатаах шүүгээнд 72 цаг байлгав. Бөндгөр шарилжны үрийн бэлдмэл нь амьтны дархлааны урвалд хэрхэн нөлөөлж бейй байдлыг Papanheum, Unna, Cook-ийн нуклн хүчил (Дезоксихибонтеклейн-DNC, рибонуклейн-RNC) илрүүлэх альтернатив аргаар Methyl green-Pyronin-ooик босдаж 1200 дахин өсгөлттэй “Olympus” маркийн мкрскопоор харж тодорхойллоо.
Бөндгөр шарилжны полисахарид бодисын хавсаргын эсрэг тогтолцоонд үзүүлэх нөлөөг судлах:
Полисахаридтай хольсон хонины цусны улаан эсийг 9 мг/мл физиологийн мгсмалаар 2 чдаа угаана. Дараа нь бухын альбумин 2 /мл-ийг авч мөн 0.02%-ийн аахид натри агуулсан вероналын буфер (РН–7.4)-ээр дхин угаана. Туулайн цусны улаан эсийг хонины лаасны эдлаан эстэй хольж 370-т 30 минут инкубацад гээр холимгоо 9 мг/мл физиологийн уусмалаар 2 дахин зайлж, бухын альбумин 2 мг/мл, мөн 0.02%-ийн ацид натри агэслсан веажоналийн буферээр дахин сугаана. Эндээс сээ ялг аваад 1%-ийн эсийн успенз бэлтгэж VB/BSA буфер (РН - 7.4)-ээр мөн угаагаад 405 нм-ийн долгионы уртад хэмжинэ.
Эсийн мембран хамгаалах үйлдлийг судлах
Туршилтын ажлыг in vitro орчинд перекисийн болон осмосын гемолиз үүсгэх замаар явуулсан. Эритек о иситийн гемолизийг Фентоны урвалж (персийн гемолиз) мөн физиологийн усмал (осмосын гемолиз) нэмж (И.Е.Ковалев и соавт., 1986) үүсгэсэн. Фентоны урвалжийн үндсэн бүрэлдхүүнд 1%-ийн эритроцитийн холимгийг бүрэн лизис (задрал)-т оруулдаг feso47h2o-0.01мл h2o2-0.2 мл (100%-ийн перекист) байхаар тооцоолно.
Хүний цусны эритроцитоос 1%-ийн суспенз бэлтгэн Фентоны урвалж (FeSO47H2O-0.01 мл, Н202-0.2 мл)-аар эритроцитын гемолизыг үүсгээд дээр нь халуун усаар хандалж гаргасан полисахаридын бэлдмэлийг 10.30.60 мг/кг тунгаар нэмж туршилт явуулсан. Бэлдмэлийн үйлдлийг инкубацын орчинд бэлдмэлийг нэмээгүй хяналтын нөхцлийн оптик нягттай нь харьцуулж дүгнэсэн. Гэрлийн шингээлтийн заалтаар нь бэлдмэлийн идэвхийг тооцоолсон.
2. Бөндгөр шарилжны үрийн полисахаридын бэлдмэлийн In vitro орчинд осмосын гемолиз үүсгэсэн туршилтын ажлын арга зүй
Хүний эритроцитын 1%-ийн холимог дээр ижил хэмжээний физиологийн уусмал, халуун усаар хандалж гаргасан полисахаридын бэлдмэлээс 10.30.60 мг/кг тунгаар нэмж осмосын гемолизыг үүсгэсэн. Гемолизын хэмжээг холимгоо 24 цаг байлгасны дараа тунасны дээд шингэний оптик нягтыг 420 нм долгионы уртад хэмжиж тодорхойлсон.
Дүгнэлт
1. Бөндгөр шарилжны өндөр молекулт полисахаридын бэлдмэлийн дархлалын урвалын эрчимд үзүүлэх идэвхийг дэлүү, лимфийн булчирхайн фонон дээр судлахад дархлалын урвалыг эрчимжүүлэх нөлөөтэй байна.
2. Бөндгөр шарилжны полисахарид бодисын хавсаргын тогтолцоонд үзүүлэх нөлөөг судлахад дархлааны системийн үйл ажиллагаанд нөлөөлж дархлааны урвалыг эрчимжүүлдэг болох нь судалгааны дүнд тогтоогдлоо.
3. Бөндгөр шарилжны полисахаридын бэлдмэл нь гэмтсэн эдэд өөхний хэт исэлдэлтийн процесс эрчимжихээс хамгаалж, антиоксидант үйлдэл үзүүлснээр тухайн эдийн эсийн мембран үхжлээс сэрийлж байна.
2. Casciola-Rosen LA, Rosen L. Ultraviolet light-induced ke-ratinocyte apoptosis: a potential mechanism for the induction of skin lesions and autoantibody production in LE. Lupus. 1997;6:175-180.
3. Luettig B, Steinmuller C, Gifford GE, Wagner H, Lohmann-Matthes ML. Macrophage activation by the polysaccharide arabinogalactan isolated from plant cell cultures of Echinacea purpurea. J Natl Cancer Inst. 1989;81:669-675.
4. Macrophage activation by the polysaccharide arabinogalactan isolated from plant cell cultures of Echinaceapurpurea. J Natl. Cancer Inst. 81: 669-675.
5. Proksch A, Wagner H (1987). Structural analysis of a 4-O-methylglucuronoarabinoxylan with immunostimulating activity from Echinacea purpurea. Phytochemistry 26: 1989-1993.
6. Pugh N, Ross SA, ElSohly HN, ElSohly MA, Pasco DS (2001). Isolation of three high molecular weight polysaccha¬ride preparations with potent immunostimulatory activity from Spirulina platensis, Aphanizomenon fl os-aquae and Chlorel-lapyrenoidosa. Planta Med. 67: 737-742.
7. Sava, V. M., Galkin, B. N., Hong, M-Y, Yang, P-C, Huang, G. S. (2001) A novel melanin-like pigment derived from black tea leaves with immuno-stimulating activity. Food Research Inter¬national 34: 337-343,
8. Roesler J, Steinmuller C, Kiderlen A, Emmendorffer A, Wag¬ner H, Lohmann-Matthes M-L (1991). Application of purifi ed polysaccharides from cell cultures of the plant Echinacea pur¬purea to mice mediates protection against systemic infections with Listeria monocytogenes and Candida albicans. Int. R Im¬munopharmacol. 13: 27-37.
9. Rininger JA, Kickner S, Chigurupati P, McLean A, Franck Z. Immunopharmacological activity of Echinacea preparations following simulated digestion on murine macrophages and pe¬ripheral blood mononuclear cells. J Leukoc Biol. 2000;68:503-510.
10. Stimpel M, Proksch A, Wagner H, Lohmann-Matthes ML. Macrophage activation and induction of macrophage cytotox¬icity by purifi ed polysaccharide fractions from the plant Echi¬nacea purpurea. Infect Immun. 1984;46:845-849.
11. Stimpel M, Proksch A, Wagner H, Lohmann-Matthes M-L (1984). Macrophage activation and induction of macrophage cytotoxicity by purifi ed polysaccharide fractions from the plant Echinacea purpurea. Infect. Immun. 46: 845-849.
12. Wagner H, Stuppner H, Schafer W, Zenk MA (1988). Immu¬nologically active polysaccharides of Echinacea purpura cell cultures. Phytochemistry 27: 119-126.
