“Гялс” Анагаах ухааны төв, ХХК,Монголын анагаах ухааны академи
Өгүүллийн PDF-ийг татах
Researchers are agree about the importance of quantative determination of nucleic acids (NA) of HBV and HCV for selection of therapeutic intervention type and for developing of prognosis of the disease. Therefore in the developed countries it is customary to develop and upgrade consensus guidelines for diagnosis and treatment based of HBV and HCV infections on viral counts [A.S.Lok and B.J.McMahon, 2007; M.G.Ghany et al., 2009;].
In our country it is just starting to introduce quantative determination of HBV and HCV NAs and there is no consensus guidelines for diagnosis and treatment of viral hepatitis based on viral counts, so far. This is a challenging situation and sometimes it creates bias for patients and doctors. “Gyals” Medical Center, Co., Ltd. is performing of viral NA counts of HBV and HCV since 2009 and this small experimental observation is aimed to test whether specimen types and storage conditions of samples, methods of NA extraction affect the final results of the laboratory investigations.
We have tested 41 samples tested positive for HBsAg with rapid immune-chromatographic test kits of “Acon”, USA and 44 samples tested positive for anti-HCV by the same method. NAs of the selected samples in the forms of whole blood, serum and plasma were extracted by an automatic extractor (ExiPrep 16, Bioneer, Korea) and by the classic isopropanol extraction in parallel. HBV and HCV NAs were determined quantatively in rt-PCR with Bioneer Exicycler 96, Bioneer, Korea.
DNA quantity of HBV in the whole blood samples were 2.2-4.5 times lower than in sera and plasmas, whereas RNA quantity in the whole blood samples were approximately equal those in plasma, however, 3.3-3.4 times lowers than in sera. So, it can be concluded sera and plasmas are both suitable for HBV DNA quantification, and only sera are more suitable for HCV RNA quantification by rt-PCR. The quantity of HBV DNA and HCV RNA were differing in all kinds of samples by 2.2%-16% by hand and automatic NA extraction, however, the difference was statistically nt significant. Quantification with the automatic extraction has shown statistically significant better results in the samples with low viral load samples.
For testing of storage conditions we have tested only plasma samples in 2 conditions: 1) plasma samples, and 2)NA samples extracted from plasma and stored in -70° C for 1-3 weeks. There were no significant difference of viral counts in 2 types of samples over 1-3 weeks storage in -70° C.
Some bias has been created also when different laboratories use different expressions like copies/ml (or /dl, l) and IU/ ml (or /dl, l). Also different companies are recommending different coefficients for calculations of IU/ml from copies/ml expressions.
We consider it is time now to develop a consensus guideline specific for Mongolia on diagnosis and treatment of viral hepatitis based on the viral loads by laboratories using this technology together with clinicians.
Хепатитийн В (HBV) болон С (HCV) вирүст халдварын эмчилгээний дэглэм сонгох, өвчний тавиланг таамаглахад цусан дахь эдгээр вирүсийн тоон хэмжээг тодорхойлох нь зарчмын ач холбогдолтой гэж судлаачид үзэж буй бөгөөд, хөгжингүй орнуудад бол нийтээр баримтлах зөвшөлцсөн удирдамж (consensus guideline) боловсруулан хэрэглэдэг байна [A.S.Lok and B.J.McMahon, 2007; M.G.Ghany et al., 2009;].
Манай орны хувьд хепатитын вирүс тоолох шинжилгээ эхлэл шатнаа яваа, лабораторийн болон эмчилгээний зөвшилцсөн удирдамж байхгүй байгаа нь шинжилгээний дүнг жишихэд ихээхэн бэрхшээл учруулж, заримдаа өвчтөнийг чирэгдүүлэхэд хүрч байна. “Гялс” Анагаах ухааны төв(ГАУТ)-д 2009 оноос эхлэн HBV болон HCV-ийн нүклейн хүчил(НХ)–ийн тоон үзүүлэлтийг шинжлэж эхлэсэн бөгөөд энэ удаа бид дурьдсан шинжилгээнд сорьцын төрөл, болон хадгалах хугацаа, нуклейн хүчил ялгах арга шинжилгээний эцсийн үр дүнд ямар нөлөөтэйг судлах зорилт тавьсан болно.
Бид судалгаандаа түргэвчилсэн иммунхроматографын шинжилгээний “Acon”, USA оношлуураар HBsAg эерэг гарсан 41 шинжлүүлэгч, мөн пүүсийн оношлуураар anti-HCV эерэг гарсан 44 шинжлүүлэгчийн сорьц авч бүхэл цус, сийвэн, ийлдсээс НХ–ийг БНСУ-ын Bioneer компаны ExiPrep 16 (автомат) арга, изопропанолоор тундасжуулах гар аргаар ялган авч, Bioneer Exicycler 96 багаж, уг пүүсийн оношлуур ашиглан бх-ПГУ-аар HBV болон HCV-ийн нүклейн хүчлийн тоон үзүүлэлтийг тодорхойлох шинжилгээ хийж, харьцуулсан юм. Бүхэл цусанд хийсэн шинжилгээгээр HBV-ийн ДНХ эерэг үзүүлэлт ийлдэс болон сийвэнд хийснээс 2.2-4.5 дахин цөөн, харин HСV-ийн РНХ эерэг үзүүлэлт сийвэнгийнхтэй ойролцоо, ийлдэсэнд хийснээс 3.3-3.4 дахин бага байгаа нь HBV-ийн ДНХ илрүүлэхэд ийлдэс буюу сийвэнг, HСV-ийн РНХ илрүүлэхэд ийлдсийг ашиглах нь зүйтэй болохыг харуулсан болно. Гар болон автомат аргаар ялгасан НХ-ийн хэмжээ нь хоёр вирүсийн аль алинд 2.2%-16% зөрөөтэй гарч байсан боловч зөрөө нь статистикийн хувьд үнэн магадтай байж чадсангүй. Харин сорьцны вирүсийн НХ-ийн тоон хэмжээ бага байвал автомат аргаар НХ илрүүлэх нь статистик магадлалтай илүү байлаа.
Сорьц хадгалалтын хугацаа вирүсийн НХ илрүүлэхэд нөлөөлж буй эсэхийг судлахдаа бид сийвэн ялгасан сорьц авч: 1) сийвэн хэвээр нь, 2) сийвэнгээс ялгасан ялгасан НХ-ийг 1-3 долоо хоног -70° С-д хадгалж НХ-ийн тоон үзүүлэлт өөрчлөгдөх эсэхэд ажиглалт хийлээ. Сийвэн болон ялгасан Нх хоёр хоёулаа -70° С-д нэн бага өөрчлөлттэй хадгалагдаж байсан бөгөөд вирүсийн НХ-ийн тоо эхнээсээ цөөн байсан бол хадгалагдах явцад багасах нь илүүтэй байдаг бололтой.
Мөн лабораториуд шинжилгээний хариуг copies/ml(dl, l) болон IU/ml(dl, l)-ээр илэрхийлдэг, багаж бүрт copies/ml(dl, l)-ийг IU/ml(dl, l)-д шилжүүлэх өөр өөр коэффициет хэрэглэдэг нь зарим тохиолдолд өвчтөнүүд төдийгүй, эмч нар төөрөлдөх шалтаг болдог ажээ.
Иймээс HBV болон HCV-ийн нүклейн хүчлийн тоон үзүүлэлтийн шинжилгээ хийж байгаа лабораториуд болон эмчлэгч эмч нар хамтран манай нөхцөлд тохирсон зөшилцсөн удирдамж боловсруулах нэн шаардлагатай болжээ хэмээн бид үзэж байна.
