Халдварт Өвчин Судлалын Монголын Сэтгүүл, 2009, 4(29)

Хибрид эсийн өсгөвөр болон полимеразын гинжин урвалын аргыг ашиглан амьсгалын замын зарим вирүсийг эмнэлзүйн сорьцонд илрҮҮлэх харьцуулсан судалгаа (Анагаах ухааны мастерын зэрэг горилсон диссертацийн хураангуй)

( Судалгааны өгүүлэл )

Горилогч: С.Цацрал

Халдварт өвчин судлалын үндэсний төв

 

   Өгүүллийн PDF-ийг татах

Абстракт

 

Supervisor:

• Prof. P.Nymadawa, MD, Ph.D, DSc(Med),NCCD, Mongolia

 

The most common disease in the current earth is acute respiratory infections (ARI). Some researchers consider that everyone gets sick with acute respiratory infections 6 times in a year. Acute respiratory diseases increase relating with a progress of urbanization and population crowd and can cause even to death. Age groups of under 2 and above 65 are more vulnerable to this disease. There was registered 753.8 cases of Influenza and influenza-like illness (ILI) per 10 000 population in 2006- 2007 season in Mongolia taking 5.8% of 3,309,421 outpatient visits. Case fatality rate of pneumonia was 0.47% resulting 52 deaths out of 11,034 pneumonia cases. Therefore ILI is considered as one of public health problems facing in many countries of the world causing serious impact on health and economy. Approximately 95% of the primary cause of ARI is virus. Insufficient technology on complex diagnosing of ARI viruses in Mongolia has brought to experiment this new technology.

Goal

To compare PCR method with a new technology on identification of some viruses causing of ARI by using immune-flourescence microscopy with culture of R-Mix ready hybrid cell produced by Diagnostic Hybrids Co., Ltd.

Objectives

• To select specimens randomizely during high risky period of ILI morbidity between January to March.
• To determine serotype of Inflienza viruses by using PCR.
• To determine serotype of Inflienza viruses by immunofluorescence microscopy after cultivating with R-Mix ready cells with DFA kit for antigen detection of 7 viruses of ILI.

Novelty of the study

• The second country in Asia which experimented new and high sensitive technology on identification of some kind of influenza viruses after cultivating with ready cells.
• The first study in Mongolia which compares this new technology with molecular biology method.

1.1 Scope and materials

There was used 50 naso-pharyngeal swabs taken from outpatients with ARI visited to a district hospitals and family clinics in Bayanzurkh, Bayangol, Sukhbaatar, Songinokhairkhan, Khan-Uul, Chingeltei, Nalaikh and Baganuur districts and Maternal and Child Health Research Center of UB city as a study material. The specimen was taken randomizely during peak period of influenza season or first quarter of the year. The sample was taken by the guidance (Annex 8) according to a diagnosis (annex 5) approved by the order #253 of Minister of Health dated 2006.

1.2 Study methodology

Serotyping of ILI viruses by PCR method Influenza A and B viruses, respiratory-sintycial virus, para-influenza1,2,and 3 viruses was identified by using primers with specific sequences of amino acids of respectively viruses, Viral RNA Mini Kit and RT-PCR Kit produced by Qiagen corporation. Adenovirus was identified by using primers with specific sequences of amino acids of adenoviruses, DNA Mini and Blood Mini Kit and Taq PCR Master Mix Kit produced by Qiagen corporation. Above mentioned kits were used according to manufacturer:`s instruction. Gel electrophoresis was done by running with solution of 13 microliter bromine ethyl per 100 ml 1% agarose gel in 100V for 30 min and result was read in 302 nm wave of the transilluminator. Hemagglutination test titer determination of influenza virus after cultivating with MDCK cell Influenza A and B viruses were inoculated with 200 ml MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) cell culture which were prepared by CDC protocol, USA in a flask of T-25cm3 and cultivated in 36°С for 5 days. Cytopathogenic effect of the cell culture was observed everyday by microscopy and virus titer was determined by using hemagglutination test with 0.75% erythrocyte suspention when cell damage starts. Serotyping of ILI viruses by immunofluorescence microscopy Identification of influenza A and B viruses, respiratory- sintycial virus, para-influenza1, 2, 3 viruses and adenoviruses by immunoflourescence microscopy was done by using R-Mix ready cells and respiratory virus detection DFA kit which is new product of the DIAGNOSTIC HYBRIDS corporation. Kits were used according to manufacturer`s instruction. Statistics of the study materials Hi-square criteria was used to conclude statistical reliability.

1.1 Age and sex distribution of the subjects The precentage of young children (56%) among study subject indicates it as a most vulnerable age group of ILI (Figure 1), There was no significant difference between male and female subjects (Figure 2).

1.2 Comparison of diagnostic methods of ILI viruses. Result of Immunoflourescence microscopy in RMix ready cell Serotyping of influenza A and B viruses, respiratory- sincytial virus, adenovirus and parainfluenza 1, 2, and 3 viruses which used respectively virus antigen detection DFA kit after immunomicroscopy of R-Mix ready cell culture resulted that 50% showed as a ILI virus positive and 50% - as a negative.(Figure 3). Result of viral titer determination by hemagglutination test in MDCK cell culture There was 1 influenza A virus with 1:16 titer and 1 influenza B virus with 1:64 titer during 3 passages in MDCK simple cell culture. But by R-Mix ready cell cultivating, there was cultivated influenza A virus in 10% and influenza B virus – 50%. Those showed that MDCK cell culture is less sensitive compared with R-Mix ready cell culture. Result of PCR Serotyping of above mentioned 7 viruses by PCR and RT-PCR showed that 40% has positive and 60% - negative result (Figure 4). Influenza A virus serotyping by RT-PCR which used primers with HA1, HA3, NA1 and NA2 genes showed 2 (20%) A(H1N1) viruses and 8 (80%) A(H3N2) viruses (Figure 6). Respiratory-sincytial virus serotyping by RTPCR which used primer with N gene of RSVA and RSVB subtype showed that all viruses belong to RSVA subtype (Figure 7). This conforms with the result of the study which was done in Respiratory Viral Laboratory of the National Center for Communicable Diseases in 2007/2008 influenza season. Comparison between diagnostic methods The comparison between serotyping of 7 viruses of ARI by PCR and cultivating with MDCK simple cell and R-Mix ready cell culture in 50 specimens selected as a study subject showed the result as shown below (see table 1). Table 2 shows that result of the serotyping of influenza A, B viruses and parainfluenza-3 viruses by immunofluorescence microscopy with R-Mix ready cell culture conforms completely with the result of RT-PCR while result of serotyping of RSV conforms 75% and adenovirus – 50%. However the result of R-Mix ready cell culture does not conform with the result of RT-PCR for parainfliuenza-1 virus (Figure 8). In other words, sensitivity of the R-Mix ready cell is 50% and PCR`s is – 40%. Statistically this is confirmed by using Hi-square criteria as follow: If Х2=10, v=1 then р=0,01 Х01 2=6,63 or Х2≥Х01 2 which is confirmed with 99%. that R-Mix ready cell is advantageous than PCR with 99%

1. Influenza A virus and respiratory-sincytial virus was dominated in the first quarter of 2008. The result of serotyping by PCR showing dominance of A(H3N2), RSVA type conforms with the result of the study done with MDCK and R-Mix cell culture in the Respiratory Viral Laboratory of the National Center for Communicable Disease in 2007/2008 influenza season.
2. The comparison of cultivating of influenza A, B viruses in MDCK cell culture with R-Mix cell culture showed that influenza A virus cultivated with 10% and influenza B virus – 50% in MDCK cell culture which is considered as a relatively low rate.
3. The comparison of R-Mix cell culture with PCR showed that identification (50%) by immunofluorescence microscopy with R-Mix ready cell culture is adventageous than PCR (40%) statistically (X2=10 p=0,01).

1. Although R-Mix ready cell culture is quite expensive compared with MDCK cell culture, R-Mix cell culture is possible to diagnose many of respiratory viruses at same and short time. Compared with PCR which is considering as a high sensitive method, R-Mix cell culture is less expensive, needless of any device or kits which is necessary for PCR, easy to diagnose and possible to isolate of viruses. Therefore, this method should be introduced into practice in future.
2. It is completely possible to conduct a study by continiously using of this new technology which is produced by Diagnostic Hybrids corporation. It would be possible to use this technology even in provincial or district laboratories if deep freezer and immuniflourescence microscopy will be provided.

Mongolian Journal of Infectious Diseases Research,
2009, №4(29):53-57;
8 figures, and 1 table

 

Эрдэм шинжилгээний ажлын удирдагч:

• Академич, доктор(Sc.D), профессор П.Нямдаваа, ХӨСҮТ

 

Одоогийн ертөнцөд хамгийн элбэг тохиолдож байгаа өвчин бол амьсгалын замын цочмог халдварт өвчин (АЗЦХӨ) юм. Зарим судлаачдын бичиж байгаагаар хүн бүр жилд дунджаар 6 удаа АЗЦХӨ- өөр өвчилдөг байна. АЗЦХӨ нь улс орны үйлдвэржин, хотжих явц эрчимжих, хүн амын бөөгнөрөл ихсэхийн хирээр өсдөг бөгөөд хүний тамир тэнхээг торойтуулах цаашлаад үхэл эндэгдэлд ч хүргэж болох өвчин юм. Энэ өвчнөөр өвчлөх эрсдэл болон нас баралт 65-аас дээш мөн 2-оос доош насныханд их байдаг онцлогтой. Манай улсад 2006-2007 оны байдлаар ТТӨ 10000 хүн ам тутамд 753.8 тохиолдол бүртгэгдэж, нийт амбулиториор үйлчлүүлсэн 3309421 хүний 5.8% нь ТТӨ гэсэн оноштой байна. Мөн уушгины хатгалгаа гэсэн оноштой 11034 хүний 52(0,47%) нь нас барсан үзүүлэлттэй байгаа юм. Эндээс харахад ТТӨ нь жил бүр нийт хүн амын багагүй хувийг хамран тархаж эрүүл мэндийн болон эдийн засгийн ноцтой хохирол учруулдаг, дэлхийн олон орны нийгмийн эрүүл мэндийн тулгамдсан асуудлын нэг байсаар байна. АЗЦХӨ-ийг үүсгэгч анхдагч шалтгааны 95 орчим хувь нь вирүс байдгаас гадна ТТӨ-ийг 100 гаруй төрлийн вирүс үүсгэдэг нь ялгах оношийг ихээхэн бэрхшээлтэй болгодог бөгөөд вирүс ялгах аргаар шинжилсэн сорьцны дөнгөж 1-7%-д нь л томуугийн вирүс илэрдэг онцлогтой. Тиймээс манайд одоогоор ТТӨ үүсгэгч вирүсүүдийг цогц байдлаар оношлох технологи хомс байгаа өнөө үед АНУ-ын DHI, Inc., компанид боловсруулсан R-Mix хибрид эсийн өсгөвөр ашиглан дархан туяаралт бичил харуур (ДТБХ)-ын аргаар (RMix/ DFA) ТТӨ үүсгэгч 4 төрлийн 7 хэвшинжийн вирүс илрүүлэх хурдавчилсан шинэ технологийг уламжлалт бусад аргатай манай нөхцөлд туршин үзэх нь ихээхэн ач холбогдолтой гэж үзэж байгаа юм. Судалгааны зорилго: Амьсгалын замын зарим вирүсийг R-Mix хибрид эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ДТБХ-ын аргаар ялган дүйх шинэ технологийг MDCK энгийн эсийн өсгөвөр болон полимеразын гинжин урвал (ПГУ)-ын аргатай харьцуулан судлахад оршино.

Судалгааны зорилт:

• ПГУ-ын аргаар ТТӨ-ий вирүсүүдийн хэвшинжийг тодорхойлох
• R-Mix хибрид эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн (RMix/ DFA) ДТБХ-ын аргаар ТТӨ вирүсүүдийн хэвшинжийг тодорхойлох
• MDCK энгийн эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ЦНУаар вирүсийн таньцыг тодоройлох
• MDCK болон R-Miх эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөх аргыг ПГУ-ын аргатай тус тус харьцуулах Шинэлэг тал: R-Mix/DFA орчин үеийн өндөр мэдрэг шинэ технологийг Азид туршин үзэж буй хоёрдогч орон, Монголд анх удаа энэхүү шинэ технологийг молекул биологийн аргатай харьцуулан судалж байна.

Ач холбогдол:

Амьсгалын замын өвчлөл үүсгэгсч вирүсүүдийн дийлэнх хувийг эзэлдэг томуу, иж томуу, аденовирүс, респиратор синцитиал (рс) вирүс гэсэн 4 төрлийн 7 хэвшинжийн вирүсийг нэг дор богино хугацаанд өсгөвөрлөн ялган дүйх боломжтой.

1.1 Судалгааны хамрах хүрээ болон материал:

Улаанбаатар хотын БЗД, БГД, СБД, СХД, ХУД, ЧД, НД, БНД-үүдийн нэгдсэн эмнэлэг болон өрхийн эмнэлэг, ЭНЭШТ-д амьсгалын замын өвчлөлийн хурц үедээ үзүүлж буй үйлчлүүлэгчдийн хамар, залгиурын арчдас сорьцноос ТТӨ-ний өндөр эрсдэлтэй 1-р улиралд санамсаргүй түүврийн аргаар сонгон авсан нийт 50 ширхэг шинжлэгдэхүүнийг судалгааны материал болгон ашиглав. ТТӨ-ний шинжлэгдэхүүн цуглуулахдаа Эрүүл мэндийн сайдын 2006 оны 253 тоот тушаалын V хавсралтаар батлагдсан оношийн дагуу, VIII хавсралтаар батлагдсан журмаар авсан. 1.2 Судалгааны арга зүй: ПГУ-ын аргаар ТТӨ үүсгэгч вирүсийн хэвшинжийг тодорхойлох Томуугийн А болон В хүрээний вирүс, рс вирүс, иж томуугийн 1, 2, 3 хэвшинжийн вирүсүүдийг дүйн тодорхойлохдоо дээрхи вирүсүүдийн нуклейн хүчлийн өвөрмөц дараалал бүхий праймер, QIAGEN компаны РНХ ялгах цомог (QIAamp Viral RNA Mini Kit) болон УТ-ПГУ-ын цомгийг (OneStep RT-PCR Kit) үйлдвэрлэгчийн зааврийн дагуу ашиглав. Аденовирүсийг түүний нуклейн хүчлийн өвөрмөц дараалал бүхий праймер QIAGEN компаны ДНХ ялгах цомог (QIAamp DNA Mini and Blood Mini Kit) болон ПГУ-ын цомгийг (Taq PCR Master Mix Kit) мөн үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу ашиглан тодорхойлов. Гель электрофорез тавихдаа 1%-ийн агарозын гелийн 100мл тутамд 13мкл бромт этитий нэмж 100V-д 30 минут гүйлгэн хариуг трансиллюминаторт 302нм гэрэлд уншив. Томуугийн вирүсийг MDCK эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ЦНУ-аар таньцыг тодорхойлох Томуугийн А болон В хүрээний вирүсийг АНУын ӨХСТ-ийн протоколын дагуу бэлтгэсэн 95-100% ургалт бүхий MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) эсийн өсгөвөрт Т-25см2 хэмжээтэй фласканд 200млээр халдааж 36˚С-т термостатад 5 өдрийн турш өсгөвөрлөв. Вирүсийн эс гэмтээх үйлчлэлийг микроскопт өдөр бүр ажиглан эс гэмтэж эхэлсэн үед өсгөвөрийн шингэнийг хурааж усан гахайн цусны улаан эсийн 0,75%-ын цийдмэг ашиглан цус наалдах урвал (ЦНУ)- аар вирүсийн таньцыг тодорхойлов. R-Mix ашигласан ДТБХ-ын аргаар ТТӨ үүсгэгч вирүсийн хэвшинжийг тодорхойлох ДТБХ-ын аргаар томуугийн А болон В хүрээний вирүс, рс вирүс, иж томуугийн 1, 2, 3 хэвшинжийн вирүс, аденовирүсийг дүйн тодорхойлохдоо DHI, Inc., компанид боловсруулсан R-Mix хибрид эсийн өсгөвөр болон амьсгалын замын вирүс илрүүлэх DFA цомгийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу ашиглав.

1.2 Судалгааны арга зүй

ПГУ-ын аргаар ТТӨ үүсгэгч вирүсийн хэвшинжийг тодорхойлох Томуугийн А болон В хүрээний вирүс, рс вирүс, иж томуугийн 1, 2, 3 хэвшинжийн вирүсүүдийг дүйн тодорхойлохдоо дээрхи вирүсүүдийн нуклейн хүчлийн өвөрмөц дараалал бүхий праймер, QIAGEN компаны РНХ ялгах цомог (QIAamp Viral RNA Mini Kit) болон УТ-ПГУ-ын цомгийг (OneStep RT-PCR Kit) үйлдвэрлэгчийн зааврийн дагуу ашиглав. Аденовирүсийг түүний нуклейн хүчлийн өвөрмөц дараалал бүхий праймер QIAGEN компаны ДНХ ялгах цомог (QIAamp DNA Mini and Blood Mini Kit) болон ПГУ-ын цомгийг (Taq PCR Master Mix Kit) мөн үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу ашиглан тодорхойлов. Гель электрофорез тавихдаа 1%-ийн агарозын гелийн 100мл тутамд 13мкл бромт этитий нэмж 100V-д 30 минут гүйлгэн хариуг трансиллюминаторт 302нм гэрэлд уншив. Томуугийн вирүсийг MDCK эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ЦНУ-аар таньцыг тодорхойлох Томуугийн А болон В хүрээний вирүсийг АНУын ӨХСТ-ийн протоколын дагуу бэлтгэсэн 95-100% ургалт бүхий MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) эсийн өсгөвөрт Т-25см2 хэмжээтэй фласканд 200млээр халдааж 36˚С-т термостатад 5 өдрийн турш өсгөвөрлөв. Вирүсийн эс гэмтээх үйлчлэлийг микроскопт өдөр бүр ажиглан эс гэмтэж эхэлсэн үед өсгөвөрийн шингэнийг хурааж усан гахайн цусны улаан эсийн 0,75%-ын цийдмэг ашиглан цус наалдах урвал (ЦНУ)-аар вирүсийн таньцыг тодорхойлов. R-Mix ашигласан ДТБХ-ын аргаар ТТӨ үүсгэгч вирүсийн хэвшинжийг тодорхойлох ДТБХ-ын аргаар томуугийн А болон В хүрээний вирүс, рс вирүс, иж томуугийн 1, 2, 3 хэвшинжийн вирүс, аденовирүсийг дүйн тодорхойлохдоо DHI, Inc., компанид боловсруулсан R-Mix хибрид эсийн өсгөвөр болон амьсгалын замын вирүс илрүүлэх DFA цомгийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу ашиглав.

 

1.1 Судалгаанд хамрагдсан хүмүүсийн нас, хүйсний хамаарал

Судалгаанд хамрагдсан хүмүүсийн насны ангилалыг авч үзвэл 56% буюу талаас илүү хувь нь бага насны хүүхэд байгаа нь ТТӨ-өөр ихэвчлэн бага насны хүүхэд өвчилдөг нь тод харагдаж байгаа юм (Зураг 1). Харин судалгаанд хамрагдсан хүмүүсийн хүйсийн харьцааг авч үзвэл онцын ялгаа харагдахгүй байна (Зураг 2).

Зураг 1, 2. Судалгаанд хамрагдсан хүмүүсийн нас, хүйсний харьцаа

1.2. ТТӨ үүсгэгч вирүсүүдийн оношлогооны аргуудын харьцуулалт

R-Mix хибрид эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ДТБХын аргаар тодорхойлсон дүн R-Mix хибрид эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ДТБХ-ын аргаар томуугийн А, В хүрээний вирүс, рс вирүс, аденовирүс, иж томуугийн 1, 2, 3 вирүсийн эсрэгтөрөгч илрүүлэх DFA цомог оношлуур ашиглан хэвшинжийг тодорхойлоход 25(50%)-д нь ТТӨ үүсгэгч вирүс эерэг, үлдсэн 25(50%) нь сөрөг байлаа (Зураг 3). MDCK эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ЦНУ-аар вирүсийн таньцыг тодорхойлсон дүн MDCK энгийн эсийн өсгөвөрт 3-н сэлгүүлэлтээр өсгөвөрлөхөд томуугийн А хүрээний вирүс ЦНУ-аар 1:16 таньцтай, томуугийн В хүрээний вирүс ЦНУаар 1:64 таньцтай тус бүр нэг нэг өсгөвөрлөгдсөн. Үүнийг R-Mix хурдавчилсан эсийн өсгөвөртэй харьцуулж үзэхэд томуугийн А хүрээний вирүс 10%, томуугийн В хүрээний вирүс 50%-тай тус тус өсгөвөрлөгджээ. Энэ нь томуугийн А хүрээний вирүсийн хувьд MDCK энгийн эсийн өсгөвөр нь RMix хибрид эсийн өсгөвөрөөс даруй 10 дахин харин томуугийн В хүрээний вирүсийн хувьд 2 дахин бага вирүс өсгөвөрлөгдсөн байгаа юм. Эндээс харахад MDCK энгийн эсийн өсгөвөр нь R-Mix хибрид эсийн өсгөвөрөөс өсгөвөрлөх чадвараар дутуу байгаа нь харагдаж байна. Полимеразын гинжин урвалын аргаар тодорхойлсон дүн ПГУ болон УТ-ПГУ-ын аргаар дээрхи 7 вирүсийн генийн өвөрмөц дараалал бүхий праймер ашиглан дэд хэвшинжийг тодорхойлоход ТТӨ үүсгэгч вирүсүүд 20(40%)-д эерэг, үлдсэн 30(60%)-д нь сөрөг байлаа (Зураг 4).

Зураг 3, 4. R-Mix хибрид эсийн өсгөвөр болон ПГУ-ын аргаар ТТӨ үүсгэгч вирүс илэрүүлсэн Байдал

R-Mix хурдавчилсан эсийн өсгөвөрт ТТӨ үүсгэгч вирүсүүд хэрхэн өсгөвөрлөгдсөн нь Olympus DP71 маркийн (Япон) иммунофлюресцент микроскопт харагдах байдал (Зураг 5).

 

Зураг 5. R-Mix хибрид эсийн өсгөвөрт ТТӨ үүсгэгч вирүсүүдийн харагдах байдал (Olympus DP71 маркийн иммунофлюресцент микроскоп, 10х40 өсгөлт)

Харин нийт эерэг гарсан томуугийн А хүрээний вирүсийн дэд хэвшинжийг HA1, HA3, NA1, NA2 генийн өвөрмөц дараалал бүхий праймер ашиглан УТ-ПГУ-ын аргаар тодорхойлоход 2(20%) нь A(H1N1) вирүс, үлдсэн 8(80%) A(H3N2) вирүс (Зураг 6), респиратор синцитиал вирүсийн RSVA, RSVB дэд хэвшинжийг N-генийн өвөрмөц дараалал бүхий праймер ашиглан УТ-ПГУ аргаар тодорхойлоход 100% RSVA хэвшинжид хамаарч байлаа (Зураг 7).

 

Зураг 6, 7. Томуугийн A(H1N1), A(H3N2) вирүс болон RS вирүсийн А болон В хэвшинжийн электрофореграмм

Оношлогооны аргуудын харьцуулалт MDCK болон R-Mix хибрид эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөсөн үр дүнг ПГУ-тай харьцуулахад дараах үзүүлэлттэй байна (Хүснэгт 1).

Хүснэгт 1

Хүснэгтээс харахад R-Mix эсийн өсгөвөрийг MDCK эсийн өсгөвөртэй харьцуулахад 6 дахин их томуугийн вирүс илрүүлсэн бол харин R-Mix эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ДТБХ-ын аргаар тодорхойлсон үр дүнг ПГУ-ын аргаар дүйн тодорхойлсон үр дүнтэй харьцуулахад томуугийн А болон В хүрээний вирүс, иж томуугийн 3 вирүсийн хувьд 100% тохирч байхад рс вирүсийн хувьд 75%, аденовирүсийн хувьд 50%- тай тус тус тохирч байна. Харин иж томуугийн 1 вирүсийн хувьд R-Mix эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөгдсөн үр дүн нь УТ-ПГУ-ын аргаар тодорхойлсон үр дүнтэй нийцэхгүй байлаа (Зураг 8).

 

Зураг 8. MDCK болон R-Mix эсийн өсгөвөр, полимеразын гинжин урвалын харьцуулсан байдал

Статистик боловсруулалт R-Mix/DFA арга ТТӨ үүсгэгч вирүсийг 50%- тай илрүүлж байхад ПГУ-ын арга 40%-тай илрүүлж байгаа юм. Үүнийг бидний туршин үзэж байгаа шинэ технологи нь ПГУ-аас вирүс илрүүлэх чадварын хувьд давуу байна гэсэн дүгнэлтийн үнэн магадтай эсэхийг статистикийн Хи-квадрат (X2) -ын шалгуураар тодорхойллоо.

X2 -ын шалгуур бодох ерөнхий томъёо:

p – туршилтын материал

p1 – байж болох тоо баримт

Х2=10 байхад v=1 гэж үзвэл Х2 -ийн тархалтын хүснэгтэнд: Х2 1=2,71; Х2 05=3,84; Х2 02=5,02; Х2 01=6,63 байна. Тиймээс (Х2≥Х01 2 =10≥6,63) буюу тэглэх таамаглал няцаагдаж R-Mix эсийн өсгөвөр нь ПГУ-ын аргаас вирүс илрүүлэх чадварын хувьд давуу байна гэсэн дүгнэлтэнд хүрч байна. Энэ нь буюу дүгнэлтийг 99%-ийн үнэн магадтайгаар батлагдаж байгаа юм (р=0,01).

1. ТТӨ үүсгэгч дээрх 7 хэвшинжийн вирүсийг ПГУ-ын аргаар тодорхойлоход 20(40%) нь эерэг байсан ба үүнээс томуугийн вирүс 12(24%), рс вирүс 6(12%), иж томуугийн вирүс 1(2%), аденовирүс 1(2%) сорьцонд тус тус илэрсэн байна. Эдгээрээс томуугийн А хүрээний вирүс, рс вирүсийн дэд хэвшинжийг тодорхойлоход 2(20%) A(H1N1), 8(80%) A(H3N2), 6(100%) RSVA хэвшинжийн вирүст хамаарч байлаа.
2. R-Mix эсийн өсгөвөрт өсгөвөрлөн ДТБХ-ын аргаар тодорхойлох аргын хувьд 25(50%) нь эерэг байсан бөгөөд томуугийн вирүс 12(24%), рс вирүс 8(16%), иж томуугийн вирүс 3(6%), аденовирүс 2(4%) сорьцонд тус тус илэрсэн байна.
3. MDCK эсийн өсгөвөрт томуугийн вирүс 2(4%) өсгөвөрлөгдсөнөөс томуугийн А хүрээний вирүс ЦНУ-аар 1:16 таньцтай, томуугийн В хүрээний вирүс ЦНУ-аар 1:64 таньцтай тус бүр нэг нэг тодорхойлогдсон байна.
4. R-Mix нь MDCK эсийн өсгөвөртэй харьцуулахад томуугийн вирүсийг 6 дахин их илрүүлж байгаа бөгөөд статистикийн үзүүлэлтээр R-Mix –ийн мэдрэг болон өвөрмөц чанар, эерэг болон сөрөг үр дүнгийн үзүүлэлтүүд 100% байхад харин MDCK эст мэдрэг чанар 16,7%, өвөрмөц чанар 100%, +PV=100%, -PV=79,1% байгаа нь R-Miх, MDCK эсийн өсгөвөрөөс мэдрэг чанар болон сөрөг үр дүнгийн үзүүлэлтээрээ давуу болох нь батлагдаж байгаа юм. Харин ДТБХ-ын аргын хувьд вирүс илрүүлэх чадвар 50%, ПГУ-ын арга 40%-тай байгаа нь статистикийн X2-ийн шалгуураар R-Mix ашигласан ДТБХ-ын арга ПГУ-аас вирүс илрүүлэх чадвараар давуу гэдэг нь 99% үнэн магадтайгаар батлагдаж байна (X2=10 p=0,01).

1. R-Mix нь энгийн эсийн өсгөвөртэй харьцуулахад өртөгийн хувьд өндөр боловч ТТӨ үүсгэгч олон вирүсийг нэг дор өсгөвөрлөн оношлох боломжтой, хугацаа бага шаарддаг зэрэг давуу талуудтай, харин ПГУ-тай харьцуулахад өртөг нь харьцангуй хямд, ПГУ-д заавал ашиглагддаг шиг нарийн тоног төхөөрөмж, урвалж оношлуур шаардлагагүй, оношлох ажилбар нь хялбар, вирүсийг ялган авах боломжтой зэрэг хэд хэдэн давуу талуудтай байна.
2. Diagnostic Hybrids компаны уг шинэ технологийг гүн хөлдөөгч болон иммунофлюоресцент микроскопоор тоноглогдсон нөхцөлд бусад лабораториудад ашиглаж судалгаа явуулах бүрэн боломжтойгоос гадна хөдөө орон нутагт нэвтрүүлэх бүрэн боломжтой байна.

 

Нийтлэлийн нээгдсэн тоо: 869