Эрүүл Мэндийн Шинжлэх Ухааны Их Сургууль

Мал Эмнэлгийн Хүрээлэнгийн Вируслогийн лаборатор

Сүүлийн 20 гаруй жилийн хугацаанд мезенхимийн эсийг эрчимтэй судалж, өндөр хөгжилтэй орнуудад нөхөн сэргээх анагаах ухааны салбарт мезенхимийн эсийн судалгаа ихээхэн ач холбогдолтойд тооцогдож байна. Мезенхимийн эс нь мезодермийн эгнээний эс болон хөгждөг болох нь тогтоогдож, ясны чөмөгнөөс гадна бусад олон эдээс мезенхимийн эсийг гарган авч, эсийн эмчилгээгээр гэмтсэн эд эсийн бүтэц болон үйл ажиллагааг нөхөн сэргээх, шилжүүлэн суулгах суулгацын судалгаа хөгжиж байгаа нь нөхөн сэргээх анагаах ухаанд шинэ боломжуудыг нээж өгч байна.1,2,8 Мезенхимийн эсийн нэг томоохон эх үүсвэр бол ихэс бөгөөд ихэс нь эх ургийн дархлаа зохицуулгад чухал үүргийг гүйцэтгэдэг, олдоц сайтай эх үүсвэр болохын дээр ёс зүйн асуудал үүсгэдэггүй зэрэг нь олон судлаачдын сонирхлыг татан сүүлийн жилүүдэд ихэсийг судлах, ихэс болон хүйнээс ялган авсан мезенхимийн эсийг судлах ажлууд ихээр хийгдэж байна. Бид Улаанбаатар хотын Клиникийн Нэгдүгээр Амаржих Газар төрөх үеийн хүндрэлгүй төрсөн эрүүл эхийн нийт n=11 ихэсийг авсан бөгөөд эдийг задлах фермент болон механик аргуудыг ашиглалаа. Ихэсийн амнион, хорионы бүрхүүл; амнионы мезодермийн давхарга; ихэсийн хүй; Вартоны цэлмэн гэх мэт 6 хэсгээс сорьц аван, ферментээр үйлчлэхдээ коллагеназаг дангаар болон трипсинтэй хамтаар сонгосон ба гомогениризатор, мэс заслын хутгын ир, хайч гэх мэт багажаар механик жижиглэлт хийх аргуудыг хослуулан хэрэглэсэн. Эдгээрээс 0.5 мкг/мл коллагеназаг трипсинтэй хамт үйлчлэн механик аргатай хослуулж эдийг задлах нь хамгийн үр дүнтэй байлаа. Харин ихэсийн эдүүдээс амнионы мезодермийн давхарга нь эсийн ялгаралт хамгийн өндөр буюу эсийг трипан хөхөөр будаж тоолоход 7×105 байсан бөгөөд эдийн задрал хамгийн сайн явагдах ихэсийн хэсэг хэмээн үзэж байна.

Introduction: Mesenchymal stem cells (MSCs) represent a promising source of progenitor cells having the potential to repair and to regenerate diseased or damaged skeletal tissues. Bone marrow (BM) has been the first source reported to contain MSCs. However, BM-derived cells are not always acceptable, due to the highly invasive drawing and the decline in MSC number and differentiative capability with increasing age. Human umbilical cord (UC), placenta is obtainable by donation with a non-invasive method, has been introduced as an alternative source of MSCs. In this study we attempts to compare methods for the human placenta, UC-derived MSCs isolation technique. We are used two types of enzyme for tissue digestion and mechanical methods for isolate MSC from placenta. Methods: Placentas (n=11, gestational age, 37-40) were collected and processed 1-6 hours after normal deliveries (First Maternity Clinic in Ulaanbaatar). Collected tissue was washed with PBS and DMEM and homogenized by scalpel and homogenizer and then cells were isolated enzymatic digestion by collagenase and trypsin-EDTA solution. Collected cells were counted Neubauer chamber with trypan blue staining. Cells were cultured in DMEM medium supplemented with 10% FBS and 100μg\ml ampicillin, 200 μg\ml amphotericin and were incubated in 37oC CO2 incubator. Result: The mesenchymal stem cells were isolated from placental chrionic and amnionic membrane, mesodermal layer, umbilical cord, Wharton’s jelly. We used 0.2, 0.5 μg\ml collagenase and 0.25% trypsin-EDTA solution. Our result showed that mixed collagenase with trypsin-EDTA solution is a more sufficient than single enzymatic digestion. We are collected six different site of sample from placenta and tissue digested by several types of methods which vary of enzymatic digestion time. Because prolonged enzymatic digestion effects cell damage and it is observed in microscopic analysis. Therefore to enzymatic digestion time is the important factor for the isolation of the cell. More useful method for the isolate the cells was using 0.5 μg\ml collagenase with 0.25% trypsin-EDTA solution. Also according to the our methods, it shows amniotic mesodermal layer was most eligible site for the isolate the cells from placenta which cell concentration was 7×105. In the first day of culture cells were adhered to flask wall and fibroblastiod cells were observed in microscopic analysis. After cell culture was viable and fibroblast like shaped cells presented more than the first week. Conclusion: In this study shows that the placenta derived cells can be isolated by enzymatic digestion and mechanical homogenization. Our result showed that most eligible sample for isolation of mesenchymal stem cell was amniotic mesodermal layer, 0.5 μg\ml collagenase is the most suitable concentration

of tissue digestion.

Судлаачдын бусад өгүүлэл

Сүүлд хийгдсэн